Diabetologia：激活但新功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出胰脏自身突变到显现出1HG癌症医学患者的方面不下在学龄前时期就有很好的说明了，多个胰脏自身突变无患者的学龄前之中有70%在血清转化后10年内入院癌症，而随访15年的学龄前这一比率提高到84%。比起之下，占医学1HG癌症一半以上的HG1HG癌症的得病必要还没得到充分的研究成果。

越来越多的人开始可用分期系统来定义1HG癌症的方面：群躯在显现出多种胰脏自身突变时踏入第1收尾，显现出血糖异常时踏入第2收尾，显现出患者时踏入第3收尾。一些多发胰脏自身突变无患者的群躯，在1期和2期，方面快速，并转变为得病的1HG癌症。我们之前说明了了一分组在首次样品到多种胰脏自身突变结果结果显示后多于10年无癌症的极比较慢方面者，这分组病征人数极少，但相同之处非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗体特异性CD8+T细胞会重排在方面快速的病征之中大躯上不普遍存在，但在全面性得病和长期以来普遍存在的癌症病征之中很容易样品到。这不太可能表明，与方面病征比起，这些病征自身免疫重排的调节增强。

早期研究成果表明，尽管调节性T细胞会(Treg)数量但会，但癌症病征普遍存在一些新功能缺陷，其之中包括对IL-2的重排并能减极少。此外，癌症病征之中的不稳定性CD4+T细胞会不太可能对调节更具抵抗性，显出为不稳定性T细胞会的诱发消退，自然现象转化成的Treg和躯内转化成的诱导Treg，以及抗体境况的CD4+T细胞会之中IL-2重排消退。本研究成果的目的是说明了了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群极快速方面者之中的相同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以这群人基础上的纵向研究成果，在21岁以下住院的病征亲戚之中躯检1HG癌症的脆弱各种因素。我们之前说明了了长期以来快速方面者的相同之处，他们保持一致多重胰脏自身突变无患者超过10年，但没显现出癌症的医学患者，比较慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持一致无癌症并愿意提供大量血液结果结果显示的快速方面者纳入T和B细胞会新功能量化。在目前的研究成果之中，8名比较慢方面者(SP分组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的胰脏自身突变无患者。所有的与会者都属于1HG癌症方面的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些抗体的无患者重排，然而，一名病征已经属于2期多于6年，但没显现出医学患者，一名病征被病症为癌症，该受测者72岁，在通过观察实验结果结果显示时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之中对该诱导透过了直接评量。裂解外周血单个核细胞会(PBMCs)，有别于多实例流式细胞会奥义和T细胞会诱发实验评量诱导之中Treg的频五音、表HG和新功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、总括和回归)透过无统筹聚类量化，评量Treg表HG。

结果：与身躯健康诱导比起，来自比较慢方面躯的清醒CD4+T细胞会的统筹聚类结果显示，激活的清醒CD4+ Treg频五音提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达提高有关。一名HbA1c急剧下降的病征与方面快速者和也就是说的对照分组比起，Treg五音有所相同。新功能量化表明，与身躯健康诱导比起，来自快速方面躯的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞会诱发明显损害。显出为对不稳定性CD4+T细胞会CD25和CD134传达的诱发提高。

平面图1 侧重的表HG量化结果显示，CD4+Treg亚HG在比较慢方面函数调用之中提高。由FlowSOM生成的Treg楼内，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物传达检验出10个元簇:清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)可用9个相同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个结点代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在结点分组外围上色。每个结点之中的粥平面图表示单个记号的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示总躯记号传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成平面图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对来说同位素为每个metacluster木箱线或平面图(同位素> 0.05%)明确为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞会(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞会(l)。紫色红色代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 可用CITRUS的预测模HG证实，Treg频五音的提高是方面快速的平面图标。标准奈斯(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP与会者和也就是说的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞会上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达透过裂解，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(小点)和SP(蓝点)分组以及诱导SP 606(紫色)之中CD25+ cd127的频五音简介平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯侄集的木箱线或平面图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，对角凸显的簇被辨别为SP和HD函数调用错综复杂的相同。(j)木箱线或平面图结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说同位素(比率)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表HG(粉红色)和Treg记号相对来说传达与历史背景传达(深蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。历史背景与所有其他簇之中记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

平面图3 与身躯健康献血者比起，方面快速者清醒treg的GITR提高。每个清醒CD4+T细胞会元簇(清醒T细胞会_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞会;HLA-DR + GITR +清醒T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个传达记号的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达并联，结果显示直方平面图(c)和简介平面图(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有诱导包括，p< 0.05(深蓝色)诱导SP 606和也就是说的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR传达，从标准奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)并联，结果显示直方平面图(e)和简介平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

平面图4 来自快速方面的CD4+ treg细胞会控制不稳定性CD4+T细胞会的并能减极少。SP分组用深蓝色的线或和红色表示，HD分组用黑色的线或和红色表示，紫色的线或/红色表示诱导sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，人才3紧接著透过流式细胞会奥义样品。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg人才(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱发比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比率。可用无患者对照(激活的响应细胞会含treg)计算诱发比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 不稳定性CD4+T细胞会对快速方面的T细胞会活化的诱发更敏感。SP分组用深蓝色的线或和红色表示，HD分组用黑色的线或和红色表示，紫色的线或/红色表示诱导sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，人才3紧接著透过流式细胞会奥义(CD25反染)和细胞会因侄量化。HD Treg与HD、SP或sp606转发者携手人才。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱发前年(b)。(c,d) CD25诱发前年(c)和CD134诱发前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自快速方面侄的活化清醒CD4+Treg在GITR传达之中得到了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1HG癌症风险群躯之中的表型的必要性。

书名说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28